ronaldo_zj wrote:
体内的细胞信号通路研究确实不好评价，不过就NF-kappaB这个通路来说，我个人觉得可以通过一下几个方法来衡量：

1. 经典的NF-kappa B的活化往往都是NF-kappaB（包括p50、p65、p52等）作为转录因子活化而转位至细胞核内发挥转录调节功能。所以我觉得楼主可以首先观察和比较细胞核内的NF-kappaB的表达情况，是否存在转位增加？或者表达增加的情况？而关于细胞核内蛋白的免疫组化染色技巧及注意事项请楼主到免疫组化相关版块看看，那里有很多；

2. 第二个我觉得倒可以看看NF-kappaB的上游或下游基因或者蛋白有无活化和改变。当然这个要结合楼主的体外研究结果来选择上游或下游基因了。上游的话可以染一下IKappaB或者IKK之类的，下游的话就多了，要楼主自己结合自己的实验来选择。

3.另外一点， 即使是发现细胞核内的NF-kappaB表达增强了也不一定说明是活化的NF-kappaB，这点楼主还是要注意的，所以还是要结合与你体内研究想对应的体外结果的证实和研究，比如说体外有没有做ChiP或荧光素酶报告基因来证实NF-kappaB 体外细胞水平活化了？这样再结合体内的免疫组化细胞核染色，才能分析这个结果。

个人意见，请大家讨论，共同提高。
我想请问您，
我想通过WB和免疫组化的方法检测NF-KB的表达情况。
通过提取核蛋白和胞浆蛋白来做WB，免疫组化检测NF-KBp65的表达变化。
请问这样做行吗？