双向免疫扩散是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。
沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原、抗体存在多个系统时，可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。依据沉淀线的形态、清晰度及位置可了解抗原或抗体的若干性质，如浓度、特异性等。
打孔器及打孔模板
微量加样器及塑料吸头
抗原：0.5µg/ml牛血清白蛋白（BSA）、0.5µg/ml人血清白蛋白（HSA）
抗体：兔抗人血清白蛋白加兔抗牛血清白蛋
湿盒
三、实验方法
1．将已溶化的1%盐水琼脂管放58°C -60°C水浴箱中平衡温度备用。
2．将载玻片置于水平桌面上，倾注已溶化琼脂3.5-4ml，使成厚度约1.5mm琼脂板（注意：倾注速度不要过快，以免琼脂溢出载玻片；倾注过程要连续以保证琼脂板均匀、平滑）。
3．琼脂凝固后，将打孔模板置于琼脂板下，然后用打孔器打孔，根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次试验采用三角型，即每三个孔组成一个三角型。（因本次实验所制备的琼脂板均以载玻片为底板，故根据其大小只能采用三角型且每一琼脂板也只能打孔两组。
否则，如采用方阵型或梅花型则因琼脂板边缘琼脂厚度不够而使周边各孔所加抗原或抗体量不足或溢出，而制成三角型三组，因各孔相距过近，抗原、抗体相互渗透扩散将影响结果的判断）。
4．如图2所示，用微量加样器加10µl抗体于各组一孔中，每组所余两孔各按抗原1、2为一组，3、4为二组，5、6为三组，分别各加入10µl。注意每加一样品均需更换吸头，以防止交叉污染，影响实验结果。
5．作好标记，放湿盒中，置37°C温箱，24小时后观察结果。
四、实验结果
1．融合性沉淀孤，说明两孔中抗原相同，为同一性反应
2．两沉淀线独自形成并形成交叉，说明两孔中的抗原完全不同，为非同一性反应
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