由于课题需要，需要做乳腺癌方面的通路研究，思路问题想和大家探讨一下，希望大家多多指正：
1. 某个细胞因子（暂且定义为A）的siRNA干扰48h后，提RNA和Pr，检测细胞膜上某个蛋白（暂且定义为B）的表达水平变化（前期实验结果表明，RNA水平下调，蛋白水平还未做）
2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt，NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB
3. A siRNA 干扰48小时后，NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或者ChIP
3. PI3K阻断剂和Akt阻断剂分别预处理30min后，A siRNA 干扰48小时后，提RNA和蛋白，检测蛋白B的表达水平。

请各位老师多多拍砖。。。谢谢。。。

另外，大家有没有做过或听过siRNA共转染啊？ siRNA和质粒共转染我倒是知道，可是做siRNA共转染的文献没见过。大家有没有做过或者看到过的？

你好，你那有抑制PI3K激酶的siRNA？能告诉我在哪个公司订的吗？是否能同时抑制PI3K激酶的三个亚型啊？

fffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff

PI3K阻断剂和Akt阻断剂分别预处理30min

时间可能有些短，磷酸化水平可能还相当高。参考以下文献

Ubiquitin-dependent regulation of phospho-AKT dynamics by the ubiquitin E3 ligase, NEDD4-1, in the IGF-1 response.

PMID: 23195959