今天我想跟大家分享关于肝细胞选择的一些技巧，希望大家的研发之路可以走的顺利一些，搞科研不容易啊。

1.如果你的实验室之前没有成功分离肝细胞的经验积累，建议大家还是不要尝试了，这个的确不太容易分离而且肝细胞的冷冻复苏里面有很多的技巧，一时半会儿很难掌握（我们有客户花了8个月的时间，最终还是失败了），因此如果自己分只会浪费更多的时间。

2. 如果经济条件许可最简单的就是选用贴壁肝细胞。贴壁肝细胞比悬浮肝细胞的质量更高具体表现在以下方面：
A较少的细胞膜损伤；
B可以延长使用时间：

悬浮肝细胞6个小时就会丧失活性，因此只能用于短期实验（以小时为单位）研究，比如药物摄取，代谢稳定性和代谢物性能分析。贴壁的肝细胞可以存活几天或者 几周的时间（大于7天），可以用于长期代谢研究、体外肝毒性研究、代谢依赖的药物毒性研究、实验依赖的抑制实验研究、酶诱导研究和外排转运体研究。
C高存活率: 通常情况>90%
D高贴壁率: 将近100%
E具有对CYP1A2, CYP2B6 和CYP3A4等酶的诱导性和反应性
F完整的摄取转运体和外排转运体活性

当然，如果控制成本就要考虑的细一些，如果只是做底物代谢终产物鉴定，那么悬浮的肝细胞就可以满足你的实验要求；

3.关于肝细胞遗传背景的选择：
有些疾病如果为亚洲人高发，那么开发的药物也是针对亚洲人种，这个时候做ADMET实验就要有倾向性的选择亚洲人种而不是其他人种，据客户的使用情况来看，IVAL公司的肝细胞主要来源人种为高加索和西班牙人种。

我们这些选择经验也是通过跟多个客户交流获得的，我们一个客户从事药物开发工作，辛辛苦苦做了几年基础研究，终于到了快要申报临床的阶段了，现在申报 CFDA都要做ADMET实验，观察药物在体外的吸收、分布、代谢、排出和毒性。也就是说要在体外细胞模型上做体外代谢稳定性评价、体外代谢产物和代谢途 径的鉴定、体外代谢酶系的抑制和诱导评价以及鉴别新药前体是否是药物转运体的底物从而对药物的吸收、分布和排泄做出判断。

一个个要做的实验摆在眼前，鼓足干劲，科研人员开始学习分离大鼠的肝细胞，什么组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法统统试过来，可是细胞怎 么都不贴壁，要知道悬浮的细胞可以用作基本代谢研究，可是关于转运体的研究要求细胞膜的完整性，细胞不贴壁让科研人员们开始抓狂，心力憔悴，足足尝试分离 了大半年的肝细胞就是不能满足试验要求，这样他们非常抓狂！

他们从一些同学口中得知我们从事了十多年的动物原代细胞，他们在校的时候用过我们的大鼠间充质干细胞和心肌细胞，效果很好。于是抱着试试看的想法联系到我 们。得知他们的需求后我们提出给予一管肝细胞的试用装，并且告知我们的肝细胞来源于美国DrAlbert Li所创立的IVAL(in vitro ADMET Laboratories)公司生产。该公司可以提供人源，大鼠，小鼠，狗，猴子来源的肝细胞，肝细胞有两种：悬浮状态用于代谢研究、贴壁状态用于酶诱导 和转运体研究产。

试用装用下来效果很好，该客户要求我们把该批次的细胞都预留给他，一共500管库存，据说某些批次可以有3000管库存。要知道巧妇难为无米之炊，在中国要获得人类器官/细胞用于实验研究真是堪比登天，目前还没有合法的获得渠道。至此，该客户的研发工作算是步入了正轨。