实验方法

Western Blot试剂的准备配方大全

2014-01-20 09:57

相关专题

1. 30%储备胶溶液: 丙烯酰胺(Acr) 29.0g           亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1.0g  混匀后ddH2O,37℃溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室温。

2. 4×分离胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 8.8,定容至100ml。

3. 4×浓缩胶缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl PH 6. 8) Tris 12.1g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 6. 8,定容至100ml。

4. 10%SDS:电泳级SDS 10.0g加ddH2O,68℃助溶,浓盐酸调PH 7.2,定容至100ml。

5. 5×电泳缓冲液(PH 8.3): Tris 15.2g 甘氨酸 94g ddH2O 定容到1000ml SDS 5g  先在974ml蒸馏水中加入Tris碱,待溶解完全后,再加甘氨酸,最后加SDS。

6. 10%过硫酸铵(AP):0.1g AP加ddH2O至1.0ml,4℃保存,要在一周内使用,最好新鲜配制。

7. 2×加样缓冲液:2×SDS加样缓冲液   0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8) 2ml   10%SDS 4 ml   β-巯基乙醇 1ml   甘油 2ml   1%溴芬蓝 1ml   置4℃避光保存

8. TEMED:注意室温较低时TEMED量可加倍,最后灌胶之前再用

9. 转膜缓冲液(Towbin transfer Buffer): 即1×SDS-Page

10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) : NaCl 8.5g               (12H2O)Na2HPO4 2.9011g               (2H2O)NH2PO4 0.24g             加ddH2O定容至 1000ml

11. 封闭液: 1×PBS中加入 30ml           5%(V/V)脱脂奶粉 1.5g       0.02%叠氮钠 0.006g       0.05%Tween-20 0.015g

12. 漂洗液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS溶液  每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20

13. 水饱和正丁醇: 正丁醇 50 ml         ddH2O 5 ml 加入瓶中震荡,使结合,存于室温。  用时取上面一相加在凝胶上面。

14. 考马斯亮蓝染色法试剂:一般用G250考马斯亮蓝(蛋白定量 专用)染色液: 90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250马斯亮蓝0.25g,用Whatman 1号滤纸过滤染液以去除颗粒状物质。(染色液多次回收利用)         脱色液:90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液

15. 丽春红S染色色法试剂:2%乙酸,             0.5%丽春红的水溶液  脱色液:TBS

16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽,经反复冻融后,会发生集聚,储存液应分装成小份,保存于-20度,每一小份用后应予废弃。

17. PMSF:在溶液中不稳定,应在临用前从储存液中现加于裂解液中。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量的水冲洗。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF通常配成10mmol/L浓度储液(1.74或17.4mg/ml溶于异丙醇中)保存于-20度。

18. 显色液:联苯胺显色液(DAB)     DAB 2ml     10%H2O2 60μl     PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml

19. 三去污裂解缓冲液 0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml0.15mol/L NaCl 0.8775 g/100ml 0.02%叠氮钠 0.02 g/100ml0.1%SDS 0.1 g/100ml

扫码关注「实验菌」,入科研社群,领学习资源

更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!

查看全部

来源:互联网

扫码关注「实验菌」,入科研社群,领学习资源

更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!

知道了