微板考马斯亮蓝蛋白定量法
1. 0.01%考马斯亮蓝液的准备
称取10 mg考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue，CBB）G-250溶于5 ml 95%的乙醇中，加入85%的磷酸10ml，混匀，作为储存液保存于4℃。使用时取此母液每1.5 ml用双蒸水稀释至10ml即为工作液，应避光保存，一月内用完。若有不溶沉渣宜滤纸过滤后使用。
2. 制作标准曲线

表1 组织匀浆液蛋白含量测定中标准曲线的制作
试管编号 1 2 3 4 5 6 7
BSA Conc 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1
（mg/ml）
BSA Vol (μl)5 5 5 5 5 5 5
CBB Vol (μl)400 400 400 400 400 400 400
OD595值 0 0.022 0.039 0.082 0.119 0.159 0.197

将标准牛血清白蛋白（BSA）溶于实验所用的细胞或组织裂解液，配制成10 mg/ml的母液，稀释10倍后成为1mg/ml的二级母液，再用双蒸水分别稀释成0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml等7个浓度管，按上表操作。在试管中完成反应，随后移入酶标板，每孔200μl，测定波长490或595nm。测定完成后，以标准管的OD值为横坐标，对应的蛋白浓度为纵坐标制成标准曲线。
y = 5.0807x - 0.0057 R2 = 0.9997。（参考）
3. 样本蛋白测定：取待侧样品5μl加入400μl CBB液，其余操作同标准曲线制作，测定OD595值。所得OD值在标准曲线拟合公式上算出相应的蛋白含量。样品中的蛋白含量以mg/ml表示。
注意：
  1. 所用器械不能有蛋白污染，须经泡酸处理、洗洁精浸洗或用新的。
  2. CBB子液与所加标准品和样品的量视情况适当调整，本方案所列出比例及OD值仅供参考。
  3. 若样品为悬浊液，应将样本离心后取上清做蛋白定量以反应总蛋白量；或先将悬浊液碱化为溶液后再行测定（加入5-20％体积的2-5mol/L的NaOH，视情况而定）。
  4. 所有样品宜在2-10min内测完。
  5. 若对上样精度有把握，可以直接在酶标板内先后直接加入适量样本与测定工作液进行反应。
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