免疫组化实验步骤

试剂： PV-9000   通用二步法试剂盒     （北京中杉金桥）
ZLI-9018   DAB显色试剂盒    （北京中杉金桥）

• 脱蜡至水

1. 二甲苯Ⅰ(8min)
2. 二甲苯Ⅱ(8min)
3. 无水乙醇和二甲苯1:1(5min)
4. 无水乙醇(3min)
5. 95%乙醇(3min)
6. 85%乙醇(3min)
7. 75%乙醇(3min)
8. PBS洗3遍

二．抗原修复
抗原修复液柠檬酸钠
0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）PH值6.0。
抗原修复100℃  20min  ;自然冷却至室温。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H₂O₂和甲醇配制3%的H₂O₂溶液。室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封闭 1-2%山羊血清封闭30min
六．除去封闭液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜，一抗稀释比例：1:200
七．洗一抗。PBS洗3遍，每次5min。
八．加聚合物辅助剂1 。37℃孵育20min。
九．孵二抗2h(室温)。
十．洗二抗   PBS洗3遍，每次5min
十一.DAB显色30sec.
十二.自来水充分水洗.染苏木素、水洗、酒精分化、脱水、透明、封片。