请教一下各位老师，在构建过表达载体的时候，VEGF和GFP是不是不可以做成融合蛋白，但是如果用不同的启动子的话，很容易丢失荧光，有没有什么解决方法。

可以做成融合蛋白的，即使是使用不同的启动子的话荧光也不那么容易丢失的，大不了你将荧光的启动子换成强的如CMV，EF1a之类。

或者你可以用CMV-VEGF-IRES-GFP来做也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。

VEGF应该加在GFP的N端还是C端？

VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。

多谢大家！

GFP应该位于VEGF的C端

N端会干扰其分泌信号 影响其分泌



GFP很大 很可能影响VEGF的分泌

如果只是要筛带荧光的细胞 不需要标记VEGF 建议用pIRES2-EGFP非融合载体

要是需要标记的话

可以加小分子tag 比如flag

实在需要荧光标记VEGF的话

把GFP加在C端