这是我做PCR后跑的6%琼脂糖的电泳图。请各位分析一下，谢谢。
我扩增的目的DNA只有59个碱基，一对引物只有12bp长，都是由公司合成的。我的反应体系如下
Taq E.(5U/ul) 0.5ul
10*Buffer(Mg2+ free) 5ul
MgCl2(25mM) 3ul
4*dNTP(各2.5mM) 4ul
primer1(20uM) 2ul （Tm=51.4）
primer2(20uM) 2ul (Tm=44.6)
Template(10ng/ul) 10ul (59bp ssDNA)
ddH2O 至50ul
反应条件
Cycle=30 Denaturation Annealing Polymerixation
1st 94 2min V 30s 72 1min
Subsequent 94 30s V 30s 72 1min
Last 94 30s V 30s 72 5min
其中退火温度从39.2到47.0分为8个梯度。
图象中1-7反应条件如上述，8中没有加template，O4点的是200ng的59bp ssDNA，O44点的是50ng的59bp ssDNA。Marker没有选好，从8bp到580bp应有20多个条带，但跑不开。
我觉得1-7中跑在溴酚蓝后面的很淡的条带应该是PCR的扩增产物（8中没有），请教各位，如何排除这不是非特异性扩增呢？跑在溴酚蓝前面的1-8都有的条带是什么呢？是primer dimer吗？
我是刚开始学做PCR，现在也还在摸条件，各位大虾觉得有那些地方可以优化呢？有劳各位帮忙，也许我可以少走一些弯路，谢谢了！