实验方法

【求助】引物求助

2015-09-01 17:44

我正在一个人源细胞的PCR,需要设计GADPH和LOX-1,THF-a,IL-1,IL-6,我用PUBMED搜出来的有些有好多选择,不知道该用哪一个啊,有没有高人指点一下,第一次做,完全没概念,谢谢
还是直接找以前的文献吧,人的么,大部分都有人做过了。
http://www.rtprimerdb.org/http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/当然自己设计更能增长知识。
先把基因搜索出来,然后再设计引物,一般是使产物至少跨1个内含子。80-200bp。靠近3端,其他就是Tm之类的东东。就OK了。
首先,推荐文献来源,因子越高,可信度往往越高,有些引物虽然上了文献,但不一定好,或者说最好,别忘了有些老外用的是一刀一单位的金酶,而故意把引物序列改动后才发表SCI的也亲眼见过,所以不能盲目相信文献

其次,引物贵,几十块钱一条,推荐每次同意基因至少合成两组,我就是这么做的,
一来呢以防万一,怕被文献坑了,浪费了时间,毕竟时间才是最重要的
二来呢两个里边肯定有一个更好的,可以择优录取
我直接在PUBMED查的全序列,然后让公司去合,这样靠谱不啊

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