我先后用以下三对引物扩同一片断，退火温度在55-65度，都不出来。第三对引物Lup1我试过加1，1.5,2ulDMSO还是不出。我该怎么办？难道中间的n的个数不正确，n是两个contig之间的gap，这段序列是从ncbi的UCSC库中提取的。
先谢过！
Lep5:125-779bp=655bp
F:Acccacaactccccttctg（19）
R:Ccacacttacacaccgcact（20）

Lep1:47-738=692bb
F：Tacgctgaacgacagtttgc(20)
R：Aggaaggcacccagagaag(19)

Lup1:126-779=654bp
F:CCCACAACTCCCCTTCTGA(19)
R:CCACACTTACACACCGCACT(20)

1 ATGTGCTTCT AAGCAAGAAA ACGGGCCAGA GGCTAGGAGA TAAATGTACG
51 CTGAACGACA GTTTGCACAG CTGCGTGTAC AAGAGCGAAT TCGAATTCCC
101 TCATGTAGCA CGAACTCAGA CGTGACCCAC AACTCCCCTT CTGAGGGGCA
151 CCGAGGGCGG CACCAGGTGA ACCCGCCCCG TTCCCGCCCA GCTCCCGCCT
201 TCCTGCCGGG CAGGCCCCCA GGGACAGGGC CCTTCTCCTG CCCATCAACG
251 CGGAGCCCCG CCCCCGCTAC CCCGCCCCGC CCTCCCGTTG GCTCCTCCCC
301 TCCCTCGGGC GGTCGGAGGC GCGGCCGCGG TGTGCGCCCG GTCCCTTCCT
351 GGNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
401 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
451 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
501 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN
551 NNNNNNNNNN NNCCGCGCCG TCCCCCTCGG CCCCTCCCCC TCCCAACCCC
601 TCACGGGGGC TGCTTTCCTC GCAGCCGCGC TGCCCTCCGG CCCGGCCTTG
651 TCGGGGGCAG CGCGGGGGTC GGGCTGCGGC CCGGGTTGCT CCGTGCCCGG
701 CCCTGCGCTC GGCATCCCGC TTCTCTGGGT GCCTTCCTGT GCTTCCAGCA
751 AAGCGGGGCA GTGCGGTGTG TAAGTGTGGA TGCATCTATG TGTGCACACA
801 GCTGTATGTG TAGGTGTACT TCTGAGCAGC CCGTGTGTGC TGGGCAGTGC
851 ACCTTAGCCT TCAAGTGCAG CCTTGCGTCT ATGAGGGTAC GTGTGGGTTC