一提RT-PCR，我便黯然泪下。我参考了一篇外文，用了他的引物，并且这个引物在PRIMER5.0也验证了存在。做了三个月了，却总有非特异性条带，而且比目的条带还要亮。调了很多条件，什么退火温度，镁离子，用OLIGODT，随机引物，下游引物，AMV，MMLV反转录，加DMSO，都不行。做了对照，应该没有污染。发信过去问了原作者，他说他做的没问题。可我偏偏做无法达到只有特异性条带，终于下定决心去测序，结果更是给我一重重的打击。电泳图上和预期大小条带相符的测序结果表明竟然不是的。我知道做实验不可能一帆风顺，可是屡屡以失望告终，不知道我这个新手脆弱的心理还能承受多久，老板的耐性能坚持多久。
为什么人家能作出，我却偏偏做不出。徘徊在到底是放弃重新设计引物还是坚持调条件之间两难。对自己设计的引物没有信心，请高手帮忙设计让我参考参考，在下在这里敢恩不尽。附上序列和用的引物
1 atgaatcctc cttttgcaaa ggtctcctgg gccaccgtga cgctgctgct tctgctactg
61 ttgctgccgc ctgcggtgct gtcgcccggg gcggcggcgc agccactgcc cgactgctgc
121 cgtcaaaaga cgtgctcctg ccgcctctac gagctgctac acggcgctgg caatcacgcg
181 gccggcatcc tcactctggg caagcggcgg ccagggcccc cgggcctgca aggccggctg
241 cagcgcctcc tgcaggccag cggcaaccac gcagcgggca tcctgaccat gggccgccgc
301 gcaggcgcag agccagcgcc gcgcctctgc ccggggcgcc ggtgtctcgc tgcggctgcc
361 tcatctgtag cgccgggagg acggtctggg atctgagccc tagcccggcc ctctcccctc
421 tgcccgcccg aggtcagccc cccagaaaaa g
SENCE PRIMER：5‘CGCTGCTGCTTCTGCTACTG3’
ANTISENCE PRIMER：5‘TCAGATCCCAGACCGTCCTC3‘