siRNA制备方法:
一、体外制备
1、化学合成
2、体外转录
3、用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA
二、体内表达
1、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs
2、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达
RNAi可以直接用于疾病相关基因的抑制,从而达到疾病治疗或预防的目的。例如在抗肿瘤治疗中, RNAi可用于抑制癌基因的表达;或者利用RNAi的高度特异性敲除点突变激活的癌基因;也可用于抑制基因扩增或抑制融合基因表达;还可用于抑制其他与肿瘤发生发展相关基因(如血管内皮生长因子VEGF或多药耐药基因MDR)的表达。在治疗病毒性疾病的研究中,可以设计针对病毒基因组RNA的siRNA或针对宿主细胞病毒受体的siRNA来抗病毒。
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