请教高手，我做一蛋白的定点突变，采用overlap的方式，但当我把短片段扩出来后，就怎么也不能将全片段（1.58Kb）扩出来，我不知道是不是引物的问题，请大家帮我看看
这是整个CD序列：
ATGGAACTGAAGGCCGAGGAGGAGGAGGTGGGTGGCGTCCAGCCGGTGAGCATCCAGGCCTTCGCCAGCAGCTCCACACTGCACGGCCTGGCCCACATCTTCTCCTACGAGCGGCTGTCTCTGAAGCGGGCACTGTGGGCCCTGTGCTTCCTGGGCTCGCTGGCTGTGCTGCTGTGTGTGTGCACGGAGCGTGTGCAGTACTACTTCCACTACCACCATGTCACCAAGCTCGACGAGGTGGCTGCCTCTCAGCTTACCTTCCCTGCTGTCACGCTGTGCAACCTCAACGAGTTCCGCTTTAGCCAAGTCTCCAAGAATGACCTGTATCATGCTGGGGAGCTGCTGGCCCTGCTCAACAACAGGTATGAGATACCAGACACACAGATGGCAGATGAAAAGCAGCTGGAGATACTGCAGGACAAAGCCAACTTCCGCAGCTTCAAACCCAAACCCTTCAACATGCGTGAGTTCTACGACCGAGCTGGGCACGACATTCGAGACATGCTGCTCTCCTGCCACTTCCGGGGGGAGGTCTGCAGCGCTGAAGACTTCAAGGTGGTCTTCACACGCTATGGAAAGTGCTACACGTTCAACTCGGGCCGAGATGGGCGGCCGCGGCTGAAGACCATGAAGGGTGGGACGGGCAATGGGCTGGAAATCATGCTGGACATCCAGCAGGACGAGTACCTGCCTGTGTGGGGGGAGACTGACGAGACGTCCTTCGAAGCAGGCATCAAAGTGCAGATCCATAGTCAGGATGAACCTCCTTTCATCGACCAGCTGGGCTTTGGCGTGGCCCCAGGCTTCCAGACCTTTGTGGCCTGCCAGGAGCAGCGGCTCATCTACCTGCCCCCACCCTGGGGCACCTGCAAAGCTGTTACCATGGACTCGGATTTGGATTTCTTCGACTCCTACAGCATCACTGCCTGCCGCATCGACTGTGAGACGCGCTACCTGGTGGAGAACTGCAACTGCCGCATGGTGCACATGCCAGGGGATGCCCCATACTGTACTCCAGAGCAGTACAAGGAGTGTGCAGATCCTGCTCTGGACTTCCTGGTGGAGAAGGACCAGGAGTACTGCGTGTGTGAAATGCCTTGCAACCTGACCCGCTATGGCAAAGAGCTGTCCATGGTCAAGATCCCCAGCAAAGCCTCAGCCAAGTACCTGGCCAAGAAGTTCAACAAATCTGAGCAATACATAGGGGAGAACATCCTGGTGCTGGACATTTTCTTTGAAGTCCTCAACTATGAGACCATTGAACAGAAGAAGGCCTATGAGATTGCAGGGCTCCTGGGTGACATCGGGGGCCAGATGGGGCTGTTCATCGGGGCCAGCATCCTCACGGTGCTGGAGCTCTTTGACTACGCCTACGAGGTCATTAAGCACAAGCTGTGCCGACGAGGAAAATGCCAGAAGGAGGCCAAAAGGAGCAGTGCGGACAAGGGCGTGGCCCTCAGCCTGGACGACGTCAAAAGACACAACCCGTGCGAGAGCCTTCGGGGCCACCCTGCCGGGATGACATACGCTGCCAACATCCTACCTCACCATCCGGCCCGAGGCACGTTCGAGGACTTTACCTGCTG
这是扩前片段的上、下游引物：
P11： 5-GCCTCGAGATG GAA CTG AAG GCC-3
P12：5-GAA GGA CGT TCC GCC AGT CTC CCC-3
这是扩后片段的上、下游引物：
P21： 5-ACGTCCTTCCAAGCAGGCATCC-3
P22： ５-GCAAGCTTTCA GCA GGT AAA GTCCTC G-3
扩出两段小片段后，再用这两小片段为模板，用P11和P22为上、下游引物，进行PCR扩增，但扩不出1.58Kb的全片段了，而是500多bp的带和引物二聚体的带。不知道哪里出问题了，请高手指点！谢谢！