实验方法

【求助】信号肽序列测序有一个碱基突变还能继续往下做吗?

2015-09-11 09:38


各位高手我在做IL-24基因克隆的时候构建了一个质粒,测序后发现在信号肽的碱基处有一个突变,对于这个很是迷惑。不知道是实验中出的问题还是PCR突变,有没有可能是实验对象本身的信号肽出现突变?
出现这种情况是该继续往下做还是追究这个碱基?
继续往下做这个改变会有问题吗?
望各位高手给我指点一下,急求,急求!
这个问题已经困扰我一段时间了,我还等这继续往下做,急求急求啊
其实这种问题很简单,你如果觉得是你的“实验对象本身的信号肽出现突变”,那么你在构建质粒时就送3个构建好的单克隆测序,如果三个都是这个位点的突变,那么在很大程度上说明是你的“实验对象本身的信号肽出现突变”,反之。。。还有就是你所构建的是表达还是其他的东西,如果是表达的话,只要氨基酸序列没有改变,接下来的实验还是可以继续的,如果在其他区域,如果此位点不是你的核心区域,个人认为影响不大。
祝顺利!
哦,谢谢斑竹
原来的平板估计不能用了,当时筛选出一个就没多筛几个
不过碱基变了蛋白也由亮氨酸变为了脯氨酸,不知道会对后续的分泌照成影响,担忧啊

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知道了