1、收集细胞；

2、PBS洗涤；

3、抽提细胞裂解液；

4、蛋白定量；

5、SDS-PAGE电泳，硝酸纤维素膜或PVDF膜转移，5%脱脂奶粉封闭，室温1.5——2h或4°C过夜；

6、Caspase-3多抗或单抗室温反应1——2h或4℃过夜，TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5——10min/次；

7、HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1——2h→ TBS-T洗3次， 5——10min/次；

8、ECL显影或NBT/BCIP显色。

2.反应完毕后尽快在一小时内检测。

1. 结果采用Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。

2. 此外还有荧光分光光度计和流式细胞术分析法。