实验方法

脊髓机械性损伤模型的制作实验

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脊髓损伤动物模型,对研究脊髓损伤的病因、病理机制以及有效的干预治疗措施具有重要意义。应不同需要(模拟临床、获得稳定损伤结果),目前有多种脊髓损伤模型,包括钝挫伤(撞击、压迫伤等)、锐器损伤(切割、横断、半横断等)和其他非机械性损伤(化学、辐射、缺血等)。现有研究多采用机械性损伤模型。其中,撞击伤在临床最常见,涉及的损伤机制全面复杂,应用最广泛,如NYU和osu模型。为简化损伤机制和造成待续压迫损伤,压迫损伤模型也应用较多,包括重物压迫、气襄挤压、血管钳或摄子夹伤等。横断模型则多用于纤维再生研究。来源:《神经生物学实用实验技术》

实验前的准备及暴露脊髓

实验原理

对于各种大鼠或小鼠脊髓损伤模型而言,前提都是要去除相应节段椎板,清晰暴露需要损伤的脊髓节段,因此本节所有大、小鼠损伤模型中都是以打开飞节段椎板为前提进行的进一步损伤。

实验材料

实验动物

试剂/试剂盒

1%戊巴比妥钠 碘伏

实验步骤

(1)1%戊巴比妥钠按40-60mg/kg腹腔麻醉动物。


(2)以T10(椎体)为中心剃去背毛。


(3)暴露T8椎板,行背侧中线30-40mm纵行切口,切开皮肤及皮下组织,用乳突撑开器背侧入路暴露T6-11节段椎板。


(4) T8双侧椎板去除方法包括两种:


①将T8两侧肋横关节分离开,剪开T9两侧上关节突,眼科镊夹持T8棘突轻轻向背侧提起,使T8.9椎体间隙稍扩大,经扩大的椎体间隙在椎管腔内紧贴椎板与脊髓平行进剪,将T8两侧椎弓根剪断,以使T8椎板与椎骨分离,用眼科摄夹住T8脊突向上轻翻小心移除T8椎板,清创后清晰地显露处在硬脊膜包裹下的脊髓;


②眼科摄夹持T8棘突轻轻向背侧提起,使T8.9椎体间隙稍扩大,以咬骨钳从T8椎板尾侧缘一点点咬除椎板,至暴露椎板下脊髓最大横径。


(5)充分暴露T8节段脊髓。


(6)脊髓损伤后,止血,逐层缝合肌肉皮肤。


(7)术后人工排尿(2/d),直至动物自主排尿恢复。

注意事项

(1)去除椎板和清创过程中,务必小心操作,避免损伤脊髓。


(2)去除椎板后清创操作很重要,尽量清晰暴露脊髓最大横径。


(3)尽最保证同一实验模型由同一人操作。


(4)术中密切注意动物呼吸,及时吸痰。


(5)术后1-3d是预防动物压疮关键时期,注意及时人工排尿,垫料干燥,垫料可加厚并用手压实(避免动物下身与笼底接触),排尿后将动物下身用吹风机处理干燥。不论模型的类型,防止压疮是脊髓损伤模型后都要特别注意的。

其他

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