基本方案
实验原理
实验材料
仪器/耗材
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
将 10 mg 过氧化物酶溶解到 1 ml 0.1 mol/L pH 7.0 放入磷酸二氢钾中,加热至 30℃,并加入 60 ul SMCC 溶液(终浓度 15 mmol/L),缓慢搅拌 1 h。离心分离沉淀,将上清过柱(交联葡萄糖 G-25),并用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾洗脱。用超滤器将含有过氧化物酶的组分(先洗脱,而后测定酶活或测定 280 nm下吸收值)浓缩至 10 ml,然后加入约 10 mg 硫醇抗体,反应产物可通过凝胶过滤进一步纯化。
注意事项
其他
试剂:
过氧化物酶(辣根)
SMCC-溶液(4-{N-马来酰胺甲基}环己烷-1羧酸-N-羟丁二酰亚胺酯,Mr=334.3;溶解 5 mg 于 60 ul N,N'-二甲基甲酰胺,30℃)
交联葡聚糖 G-25 色谱柱,约 1.5 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾平衡
0.1 mol/L 半胱胺(Mr=77.2;77.2 mg 溶于 10 ml 水中)