实验方法

胰凝乳蛋白酶

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此次介绍优先切割 Tyr、Trp、Phe、Leu 氨基酸后肽键的蛋白酶。


来源:《酶学实验手册》

用 SUPHEPA 测定

实验原理

实验材料

α-胰凝乳蛋白酶

仪器/耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」




在 25℃。测定 405 nm 吸光值增加,对硝基苯胺的吸收系数为 ε405=10.2×103 l(mol · cm)

注意事项

其他

试剂:


0.2 mol/L 三甲醇胺-NaOH,pH 7.8(TEA,37.13 g TEA-HCl,2.2 g 氯化钙溶于 800 ml H2O。用 2 mol/L NaOH 调节 pH 7.8,加水至 1 L),即缓冲液Ⅰ


0.2 mol/L 三甲醇胺-NaOH,pH 7.8(TEA,37.13 g TEA-HCl 溶于 800 ml H2O。用 2 mol/L NaOH 调节 pH 7.8,加水至 1 L),即缓冲液Ⅰ


60 umol/L α-胰凝乳蛋白酶(15.2 mg 溶于 10 ml 1 mmol/L HCl 中)


0.1 mol/L N-琥珀酰-L-苯丙氨酰对硝基苯胺(SUPHEPA;Mr=385.4;385 mg溶于 10 ml 缓冲液Ⅱ)

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