实验方法

β-半乳糖苷酶的测定实验

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基本方案

实验原理

β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶。


乳糖+H2O → β-D-半乳糖+D-葡萄糖

实验材料

β-半乳糖苷酶

仪器/耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


实验混合物:


以 0.02 ml 酶溶液起始,然后 25℃ 下,在 405 nm处吸收值升高,ε450=3500 l(mol·cm)。

注意事项

其他

试剂:


0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6


0.05 mol/L 邻硝基苯基 β-D-半乳糖苷(ONPG,Mr=301.3;150 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.6)


β-半乳糖苷酶提取于 E.coli(约 300 U/mg)

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