丙酮酸激酶的测定实验_实验⽅法

PK，ATP：丙酮酸磷酸转移酶。

有其他激酶的伴随，这个反应的直接实验：

例如，可以应用 P³² 标记。由分光光度测定出，这个反应与 LDH 反应偶联，继续 NADH 的氧化反应：

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 酶样品

25 ℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH，pH 7.6（氯化三乙醇胺，Mr＝185.7；18.6 g 溶于 800 ml H₂O，用 1 mol/L KOH 调至 pH 7.6，再补充到 1000 ml）

0.5 mol/L KCl（Mr＝74.6；373 mg 溶于 10 ml 水中）

0.25 mol/L MgCl₂（六水合物，Mr＝203.3；508 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸（PEP，三环己基铵盐，Mr＝465.6；46.6 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L ADP（二钠盐，Mr＝471.2；471 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L NADH（二钠盐，Mr＝709.4；71 mg 溶于 10 ml 水中）

LDH （商业产品有大约 500 U/mg，准备溶液时需 150 U/0.1 ml）

实验方法