实验方法

由 NAD+还原反应测定的 PDHC 总活性实验

难度系数: 暂无得分

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基本方案

实验原理


实验材料

PDHC

仪器/耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物


0.02 ml 酶样品


37℃ 时,在 340 nm 处吸收值发生变化。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

注意事项

其他

试剂:


0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6


0.1 mol/L NAD(Mr=663.4,游离酸;663 mg 溶于 10 ml 水中)


0.01 mol/L 二磷酸硫胺(ThDP,脱竣辅酶,Mr=460.8;46.1 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水)


0.1 mol/L 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110.0;110 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L 二硫代苏糖醇(DTE,Mr=154.2,或二硫代苏糖醇、DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)


0.01 mol/L 辅酶 A(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)

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