基本方案
实验原理
莽草酸:NADPH+3-氧化还原酶。
它是含苯环氨基酸生物合成途径中的酶。
3-脱氢莽草酸+NADPH+H+→莽草酸+NADP+
测定逆反应。
实验材料
仪器/耗材
实验步骤
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶稀释溶液
25℃ 时,于 340 mn 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
其他
试剂
0.1 mol/L 碳酸钠,pH 10.6[Na2CO3,Mr=106;10.6 g/L,用 0.1 mol/L(约 8.4 g/L)NaHCO3 调节 pH 至 10.6]
0.1 mol/L 莽草酸(Mr=174.2;174 mg 溶于 10 ml H2O)
0.1 mol/L NADP(Mr=787.4;二钠盐,787 mg 溶于 10 ml H2O)