实验方法

莽草酸脱氢酶测定实验

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基本方案

实验原理

莽草酸:NADPH+3-氧化还原酶。


它是含苯环氨基酸生物合成途径中的酶。


3-脱氢莽草酸+NADPH+H+→莽草酸+NADP+


测定逆反应。

试剂/试剂盒

莽草酸 碳酸钠 NADP

仪器/耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物


0.02 ml 酶稀释溶液


25℃ 时,于 340 mn 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

注意事项

其他

试剂


0.1 mol/L 碳酸钠,pH 10.6[Na2CO3,Mr=106;10.6 g/L,用 0.1 mol/L(约 8.4 g/L)NaHCO3 调节 pH 至 10.6]


0.1 mol/L 莽草酸(Mr=174.2;174 mg 溶于 10 ml H2O)


0.1 mol/L NADP(Mr=787.4;二钠盐,787 mg 溶于 10 ml H2O)

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