1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml 的维持培养基消化 7 瓶 150 cm² 组织培养瓶培养的基本成片的 CEF 细胞或两瓶 BHK-21 细胞（见「细胞培养实验」基本方案 1 步骤 4～7），分装于 20 个 150 cm² 组织培养瓶中。在加湿的 5% CO₂ 培养箱 37℃ 培养至接近单层成片的程度 (通常为 2 天/L 分别对 CEF 和 BHK-21 细胞进行 1:3 和 1:10 稀释。用 BHK-21 细胞时，单层细胞密度应为 90%。

2. 移弃培养基并向每瓶中加入 30 ml MEM-2.5 完全培养基。

3. 溶解 MVA 病毒并在冰上超声 30 s 以打散病毒（消化会降低病毒滴度）。

4. 按 1～3 个感染单位将病毒加入到培养基中，在 CO₂ 培养箱中于 37℃ 培养 3 天。

5. 用细胞刮或振摇将细胞刮下，将细胞和培养基转移到 250 ml 离心瓶中。在 Sorvall RC-3B 离心机中 4℃，1200 g 离心 10 min， 弃上清。

6. 吹打或涡旋，使细胞重悬在 1 ml（每 150 cm² 组织培养瓶）MEM-2.5 完全培养基中。

7. 用反复冻融的方法裂解细胞悬液：用干冰/乙醇冷冻细胞，37℃ 水浴及涡旋解冻，如此进行 3 次。

8. 将存储液在冰上超声 1 min，隔 1 min 再超声一次，然后分装成 0.5 ml 的小份，冻存于 - 70℃。

1. BHK-21 细胞应从 ATCC 获得，从别的地方得到的细胞 MVA 病毒的复制水平也许会很低。

2. 150 cm² 组织培养瓶单层培养的 CEF 和 BHK-21 细胞数为（1～2）× 10⁷。如果病毒量不够则可少用或用小的培养瓶培养。