脂肪干细胞的神经分化
实验原理
实验材料
仪器/耗材
实验步骤
(a)吸去培养基。
(b)加人PBSA润洗细胞。
(c)加入神经诱导培养基，将培养瓶放回温箱
其他
培养基配方：
DMEM 1×、EtOH溶的丁基羟基苯乙醚36μg/ml(0.2 mol/L)、氯化钾5 mmol/L、水溶的丙戊酸2 mmol/L、DMSO溶的毛喉祐（forskolin)10μmol/L、EtOH溶的氢化可的松1μmol/L、水溶的胰岛素5μg/ml、青霉素100 U/ml、链霉素100μg/ml
在培养过程中，ASCs 可在很长时间内保持未分化状态。ASCs 具有成纤维细胞样形态，胞内缺乏脂肪细胞中所见的脂滴。体外扩增后，ASCs 的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化。ASCs 的表型与骨髓和骨骼肌来源的干细胞相似。
免疫组化染色发现，诱导的 ASCs 可以表达神经细胞标志物，包括 NeuN、MAP2、tau、β-Ⅲ微管蛋白和 NSE, 可表达的神经胶质细胞标志物，包括胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、波形蛋白（Vimentin) 和 S100。但体外神经诱导的 ASCs 不表达少突胶质细胞的标志物 04。表达神经表型标志物的 ASCs 所占的比例相对较高，如表达 NeuN 的 ASCs 占诱导细胞的 80%。这种现象表明在这个异质细胞群体中，大部分细胞都或多或少有一定程度的神经分化。此外，一些细胞共表达 NeuN 和 GFAP, 提示至少在短期培养体系中，部分 ASCs 具有向神经细胞和神经胶质细胞分化的潜能。来源：《人干细胞培养》
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