实验方法

斑点滤膜结合法测定蛋白质浓度实验

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斑点滤膜结合法是一种初步测定蛋白质含量的快速方法。此法尤其适用于密度梯度离心或柱层析中筛选有用的组分。也可用于指示蛋白峰的存在,以减少进一步进行蛋白定量的样品数。


来源:《蛋白质技术手册》

斑点滤膜结合法

实验原理

实验材料

待测蛋白质样品

仪器/耗材

Whatman 3 MM 滤纸

实验步骤

1. 用铅笔在 3 mm 滤纸上画出 1 cm x 1 cm 大小的方格;


2. 在每一方格中心加入 3 ul 样品;


3. 将滤纸凉干,大约需要 15 min;


4. 将滤纸浸入 10% TCA 溶液中 30 s(TCA 溶液可重复使用);


5. 用水快速漂洗滤纸;


6. 将滤纸浸入考马斯亮蓝凝胶染液中 30 s(染液可重复使用);


7. 用水快速漂洗滤纸;


8. 在考马斯亮蓝凝胶脱色液中使滤纸脱色,脱色在几分钟之内完成;


9. 通过相应显蓝色的方格,可判断其含有一定量的蛋白质存在。

注意事项

其他

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