实验方法

纯化的基因组 DNA 的微球菌核酸酶消化实验

难度系数: 暂无得分

收藏

MNase 可以非随机切割 DNA。因此,为确定这种天然的非随机性的模式是如何受核蛋白如组蛋白影响的,染色质的 MNase 切割模式与自由的基因组 DNA 的 MNase 切割模式的对比是十分重要的。

来源《精编分子生物学实验指南 第五版》

纯化的基因组 DNA 的微球菌核酸酶消化实验

实验原理

实验步骤

1. 取 100 ug 基因组 DNA 加入到室温的核缓冲液 C 中,使终体积为 300 ug。准备 4~5 管此溶液。


重要提示:对于每个溶液,直到反应进行到第 4 步后再进行下一管的反应。


2. 加入 CaCl2 至终浓度为 3 mmol/L。


3. 加入 MNase 至 0.5、1、2、3 U/ml。剧烈地混合使酶均匀的分布(溶液可能有些黏稠),反应 3 min。


4. 将溶液转移到含有 50 ul 0.25 mol/L EGTA 预热到 68℃ 的管子中,68℃ 温育 10 min。


5. 将管子转移到冰块上。


6. 在 1.2% 的小型琼脂糖凝胶上上样 200 ng,电泳检测消化的程度。


7. 对于感兴趣的样品加入等体积的氯仿抽提一次。


8. DNA 的沉淀、定量和鉴定。

注意事项

其他