实验原理

酵母菌落PCR”检 测 基 因 是 否 已 经 破 坏 。须用菌株7-1作 对照。保留平板。使用以下四个引物扩增DNA: 5，PEP4 GGGAACAGAGTAAAGAAGTTTGGG 5，TEF GTTCTCACATCACATCCGAAC 3，TEF GGGCTAAATGTACGGGCGAC 3，PEP4 AGGATAGGGCGGAGAAGTAAGAAAAG 2 ) 在进行PC R 扩增的同时，准 备 1.0%琼脂糖凝胶。 电泳检测每个菌落的PC R 产物。加 3 4 琼脂糖凝胶上样缓冲液到每个PC R 样品 中，将反应物全部上样，包 括 DNA标准相对分子质量标记。野生型PEP4 基因将产生 一个约1.5k b 的条带，而 等 位 基 因 将 产 生 两 个 341b p 的 条 带 （5'端连 接点）和一个约l .Okb的 片 段 （3'端连接点）。 3 ) 将 3 个 如 # 转化子在YPD+ G418平板上划线，将 菌株7-1在 Y PD 平" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/A14708124373139r4cx5zsnypng_small.jpg" style="width: 477px; height: 682px;" />

实验材料

酵母菌株7-1 BY4741 质粒pFA6a-kanMX6

试剂/试剂盒

DNA 引物

仪器/耗材

YPD 平板 SC-ura平板

实验步骤

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