实验方法

用于分子细胞遗传学的人工细菌染色体资源库实验

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人类基因组测序的主要载体人工细菌染色体（BAC)，是整合 DNA 序列和细胞遗传标志的理想材料。BAC 也适用 FISH 分析，因为 BAC 以一种稳定的，易于操作的克隆 DNA 的形式存在，能够与中期染色体和间期细胞核结合，产生明亮的、位置确定的信号。为了将人类基因组 DNA 序列与在染色体上的确切位置相联系，我们采用 FISH、PCR 和测序法建立了 BAC 资源库。BAC 资源库包括 6000 个随机定位的 BAC 克隆，其中 1021 个 BAC-STS 对代表 957 个 BAC。BAC 资源库可用于快速确定遗传性疾患和肿瘤中常见的因染色体重排而影响到的基因。经过初步的发展，国际合作收集整理的 BAC 克隆资源库共 7600 个克隆；这些 BAC 克隆既有 STS 标志，也是经 FISH 技术定位于染色体特定区带上的。

用于分子细胞遗传学的人工细菌染色体资源库

实验原理

FISH 实验前，应 在 相 差 显 微 镜 （IOX) 下阅片，选择杂交区域，保证一 个视野内至少有5 个分散好的中期，用玻璃笔标出杂交区域。 7 . 如果片龄超过2 周 ，通常省略RN A 酶处理，这并不会影响信噪比。如果 需 要 RNA 酶处理，则 于 37°C加 IOOjLtgAnL的 R N A 酶处理、 30min，之后经系 列 乙 醇 （7〇%、 9 0 % 和 1 0 0 % ) 脱水后备用。 3.2 BAC DNA提 取 （见注释7) 下 列 所 用 试 剂 购 自Qiagen，用 于 制 备 20〜 50哗 DNA (QIAGEN plasmid" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/A1470793561990h4cftskbqapng_small.jpg" style="width: 493px; height: 488px;" />






试剂/试剂盒

TB 培养基 RNase 溶液 DNA 提取试剂盒 苯酚 琼脂糖 细胞培养基 Hank 平衡盐溶液 胸腺嘧啶 秋水仙胺 低渗溶液

仪器/耗材

荧光显微镜 冷CCD照相系统 相差显微镜 玻片电热板 分光光度计 水浴摇床 恒温培养箱 冰冻载玻片

实验步骤








经验交流

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