重组腺相关病毒载体的生产实验_实验⽅法

基本方案瞬时转染 293 细胞制备无腺病毒重组腺相关病毒载体

实验原理

载体。通过双CsCl梯度分离法将irAVV载体、 pXX2 和 pXX6 质粒大量纯化（至少Img)。 2•在15c m 的皿中种2107细胞以期在第二天早上达到7 0 % 〜8 0 % 融合率。保持293个细胞线在含10% F B S 的 D M E M 完全培养基中，将皿中接近融合的细胞通过0. 05% 胰酶的E D T A 消化（见附录3 1 ) 后分装到4 或 5 个 15c m 皿中扩大培养（本实验共需 20个皿）。 3 . 扩大培养12〜16h ，将每个1 5 c m 皿中培养基弃除，加入25ml含 1 0 % F B S 的I M D M 完全培养基。孵育3h 后开始转染细胞。 4•为了转染4 个 15c m 皿，将下列物品在一次性地于50m l 聚丙乙烯管中混合： 90咫 pXX 6 辅助质粒（腺病毒辅助基因）； 30jug r A A V 细菌质粒； 30/xg pXX 2 辅助质粒（ A A V 辅助基因）； 0. 4ml 2. 5mol/L C a Q 2 溶液；" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/B1470275959909ix6yvv564kpng_small.jpg" style="width: 370px; height: 209px;" />