实验方法

淋巴细胞增殖实验

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淋巴细胞增殖法对于(1)免疫学的研究(2)淋巴细胞的T细胞,吞噬细胞等的功能研究。

淋巴细胞增殖实验

实验原理

淋巴细胞在体外经某种物质刺激,细胞代谢和形态相继变化,在24——48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加,产生一系列增殖的变化,如细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等,由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此,这种淋巴细胞增殖又叫淋巴细胞转化。据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。


(1) 非抗原性刺激物:如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陆(PWM)、脂多糖(LPS),通称促有丝分裂原。其中LPS刺激B细胞,PWM可刺激T和B细胞,PHA和ConA刺激T细胞增殖。


(2) 抗原性刺激物:如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。

实验材料

PBMC细胞悬液

实验步骤

基 本 方案 丝 裂原 诱 导 的 外 周 血 单 个 核 细 胞 增 殖 实 验

材 料



备 选 方 案 1 单向混合淋巴细胞反应

附 加 材 料(其他材料见基本方案)

R P M I 完 全 培 养 基(R P M I -10A B ) (附录 1 ) : 含 1 0 % 人 A B 血清, 56°C , I h 灭活

同种异体刺激细胞(P B M C ; 单 元 8.1)

自体刺激细胞(P B M C ; 单 元 8. 1)

丝裂霉素 C 溶 液 , 0.5m g /m l , R P M I -10A B 配 制(避 光 ,无沉淀),或细胞照射二活设备

注意事项

1. 细胞培养液终止前6h或18h,在每孔中加入20μL浓度为50μCI/ML的氘代TDR,可适当延长TDR渗入时间。


2. 根据仪器使用说明书彻底清洗细胞收集器

其他

使用全自动同步细胞收集器,洗涤,裂解细胞,并将DNA转移到滤纸上,且彻底洗掉为渗入的氘代TDR,100%甲醇洗涤滤纸条,使滤纸条易于干燥,使用半自动细胞收集器时,需将滤纸片放入对应的闪烁管中,人工收集时,将滤片置于灯下观察烘干,然后用镊子将滤纸加入对应的闪烁管中,最后在闪烁管中加入闪烁液。

本实验来自《精编免疫学实验指南》,作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等

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