实验方法

小鼠巨噬细胞的活化

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巨噬细胞的活化经历两个阶段:致敏阶段和激活阶段。活化巨噬细胞的方案多采用一 步 法 (致敏并且激活),本方案则明确区分巨噬细胞活化的这两个阶段。经过一段时间 诱 导 后 (48〜72h) ,可 检 测 巨 噬 细 胞 对 病 原 体 (如寄生虫或细菌;单 元 6. 5 和 6. 6)的杀伤作用或所合成的活性氮介质(reactive nitrogen intermediates, R N I ; 单 元 6. 5)。
作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」

小鼠巨噬细胞的活化

实验原理

基本方案 小鼠巨噬细胞的活化

材料

小鼠巨噬细胞,静 息 状 态(单 元 6.1)

D M E M - 10 : 含 1 0 % (V /V ) FBS (HyCloxie) 和 50 ug/1111 硫酸庆大霉素的 D M E M

培 养 基(G I B C O /B R L )

辅助方案炎性小鼠巨噬细胞的活化

附加材料

炎性巨噬细胞:促炎剂刺激后的小鼠腹腔巨嗟细胞(单 元 6.1)

2 4 孔 平 底 细胞培养板(Costar)

1 . 设置实验组和对照组(见基本方案步骤 1),在 2 4 孔板中每孔加入 0.5m l 细胞悬液。

2 . 置 37°C , 5 % C 〇 2 细胞培养箱中培养 I h 使巨噬细胞贴壁。

3 . 弃上清后,沿孔壁缓慢加入 Iml D E M E M - I O 培养基,避免破坏贴壁细胞层。重复洗涤 2 次 ,最后加入 0.5 ml D E M E M - I O 培养基。

4 . 致敏及激活巨噬细胞,参见基本方案步骤 2 和 4 。

实验步骤

基本方案 小鼠巨噬细胞的活化

材料

小鼠巨噬细胞,静 息 状 态(单 元 6.1)

D M E M - 10 : 含 1 0 % (V /V ) FBS (HyCloxie) 和 50 ug/1111 硫酸庆大霉素的 D M E M

培 养 基(G I B C O /B R L )

辅助方案炎性小鼠巨噬细胞的活化

附加材料

炎性巨噬细胞:促炎剂刺激后的小鼠腹腔巨嗟细胞(单 元 6.1)

2 4 孔 平 底 细胞培养板(Costar)

1 . 设置实验组和对照组(见基本方案步骤 1),在 2 4 孔板中每孔加入 0.5m l 细胞悬液。

2 . 置 37°C , 5 % C 〇 2 细胞培养箱中培养 I h 使巨噬细胞贴壁。

3 . 弃上清后,沿孔壁缓慢加入 Iml D E M E M - I O 培养基,避免破坏贴壁细胞层。重复洗涤 2 次 ,最后加入 0.5 ml D E M E M - I O 培养基。

4 . 致敏及激活巨噬细胞,参见基本方案步骤 2 和 4 。

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