实验方法

IL- 2 和 IL- 4 的检测实验

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介绍 了 使 用 鼠 IL-2和 IL- 4 的中和抗体,在一种细胞因子存在的情况下来检测并定量其中一种细胞因子的方法。由于小鼠细胞不能针对人IL- 4产生应答,使用细胞株对建立人IL- 2 的特异性测定方法非常有用。可供选择的方法还有采用人IL- 4 受 体 cD N A转 染 的 CT.4S 细胞测定人 IL- 4 , 如 CT.h4S 细胞。这 些 细 胞 对 IOpgAnl的 人 IL- 4 有 应 答 ,也 对 高 浓 度 (>lOOU/ml) 的 人 IL- 2 有应答。

作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」

IL- 2 和 IL- 4 的检测实验

实验原理

实验步骤

基 本 方 案 采 用 CTLL- 2 细 胞 检 测 小 鼠 IL - 2 和 IL -4

材 料



较 总 T C G F 和 抗 IL-4 存在时的 T C G F 单位数获得。通过比较抗 IL-4 抗体存在下的
T C G F 活性和两种抗体都存在下的 T C G F 活性的不同来计算 IL-2 活性。
IL-2 活性单位也可用已建立的小鼠 IL-2 标准计算得到。

备 选 方 案 1 采 用 CTLL-2 细 胞 检 测 人 IL -2

附 加 材 料

备 选 方 案 2 采 用 CT.4S 细 胞 检 测 小 鼠 IL -4

一 般 C T L L -2 细 胞 对 IL-2 有较好的应答,但 是 对 IL-4 的应答则时有变化。 C T L L -2 的变异亚系 C T .4S 细 胞 对 IL-4 有较强的应答,对 IL-2 的应答次之,对其他已知的细胞因 子 则 不 应 答(H u -L i ^ W . , 1989); 因此,使 用 C T .4S 可以高灵敏度地特异性检测 IL-4。 C T .4S 能用来从含有 lOOU/m l 的 IL-2 或其他细胞因子的样品中特异性地定量小 鼠 IL-4。无需使用单克隆抗体来中和 IL- 4 , 但 在确定由 IL- 4 引起的活性时则需要用到 。 C T .4S 细胞对人 IL-4 不应答。 C T .4S 细胞从 D n W .E . Paul 获 得(Laboratoryof
Immunology, National Insitute of Allergy and Infectious Diseases, Bethesda, M D20892)。 C T .4S 细胞的培养见辅助方案 3。

备 选 方 案 3 采 用 CT.h4S 细 胞 检 测 人 IL -4

附 加 材 料

辅 助 方 案 1 白细胞介素或 T 细 胞 生 长 因 子(TCGF) 单位的计算


辅 助 方 案 2 小 鼠 CTLL- 2 细胞的维持

附 加 材 料

重组人 IL-2 (A m g e n )
75c m 2 组 织 培 养 瓶(Corning)
1 . 用 添 加 l U /m l 重 组 人 IL- 2 的 R P M I -I O 完全培养基维持连续增殖的 C T L L -2 细胞。

辅 助 方 案 3 小 鼠 CT.4S 细胞的维持

附 加 材 料

辅 助 方 案 4 小 鼠 CT.h4S 细胞的维持

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