抗 磷 酸 化 酪 氨 酸 的 印 迹 检 测
实验原理
基 本 方 案 抗 磷 酸 化 酪 氨 酸 印 迹 检 测 的 准 备 及 分 析
材 料
一抗： lmg/m l 4 G 1 0 抗磷酸化酪氨酸单抗（UpstateBiotechnology) 或类似抗体
P B S
溶于 PBS/0. 0 2 % (m / V ) 叠 氮 钠 的 5 0 % (m /V ) 蛋 白 A -琼 脂 糖 悬 液（Pharmacia
L K B )
待分析的细胞
刺激物
2 X 和 I X 裂解液，冰冷
PI/P B S ，冰冷
lmmol/L 原银酸钠
I X S D S /上样缓冲液
封闭液
含 有 Tween 2 0 的 Tris 平 衡 盐（T B S T )
二 抗 ：碱 性 磷 酸 酶（A P ) -偶 联 的 抗 鼠 Ig (Promega 或 Pierce; l m g /m l 储存液以
1 : 7000 稀 释 于 T B S T 中）
V 显影液
Combitip 分液管
连续分液器
振荡器平台或轨道旋转平台， 4°C 和室温
95〜110°C 水浴或类似仪器
0.2/x m 孔径的硝酸纤维素膜（Schleicher& Schuell)
Whatman 3M M 滤纸
备 选 方 案 使 用 125I 标 记 蛋 白 A 进行检测
附 加 材 料
实验步骤
基 本 方 案 抗 磷 酸 化 酪 氨 酸 印 迹 检 测 的 准 备 及 分 析
材 料
一抗： lmg/m l 4 G 1 0 抗磷酸化酪氨酸单抗（UpstateBiotechnology) 或类似抗体
P B S
溶于 PBS/0. 0 2 % (m / V ) 叠 氮 钠 的 5 0 % (m /V ) 蛋 白 A -琼 脂 糖 悬 液（Pharmacia
L K B )
待分析的细胞
刺激物
2 X 和 I X 裂解液，冰冷
PI/P B S ，冰冷
lmmol/L 原银酸钠
I X S D S /上样缓冲液
封闭液
含 有 Tween 2 0 的 Tris 平 衡 盐（T B S T )
二 抗 ：碱 性 磷 酸 酶（A P ) -偶 联 的 抗 鼠 Ig (Promega 或 Pierce; l m g /m l 储存液以
1 : 7000 稀 释 于 T B S T 中）
V 显影液
Combitip 分液管
连续分液器
振荡器平台或轨道旋转平台， 4°C 和室温
95〜110°C 水浴或类似仪器
0.2/x m 孔径的硝酸纤维素膜（Schleicher& Schuell)
Whatman 3M M 滤纸
备 选 方 案 使 用 125I 标 记 蛋 白 A 进行检测
附 加 材 料
