单克隆细胞培养上清的制备
实验原理
材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)
杂 交 瘤（单 元 1.3)
V DMEM-IO 完全培养基
175 cm2 组织培养用细颈瓶
50m l 塑料锥底离心管，无菌
Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）
1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用（细胞密度应达到 IXlO6〜2 X 106 个细胞/ml)。避免细胞生
长密度过高导致死亡。
2.以 1 :1 0 的比例分出部分细胞至另一个 175 cm2 培养瓶中。加 入 DMEM-IO 完全培养基 至 总 体 积 100 ml，培养至细胞过度生长，培 养 基 呈 黄 色（酸性），出现死亡细胞(大约 5d)。或者，将 高 密 度 细 胞（IXlO6〜2 X 106 个细胞/ ml) 随新鲜培养基转入培养瓶，培 养 2〜3d 直到出现死亡细胞。
3.将 培 养 瓶 内 容 物 转 入 50m l 锥底离 心 管 。室 温 下 ， 1500 g 离 心 lOmin。取 上 清 ，弃沉淀。
4.用适当的方法检测上清液中 M Ab 的滴度。
5.无菌环境储存培养上清；通 常 4°C 中可以储存数周到数月，一 20°C 中可以储存至数年 ，在一 70°C 可以永久储存。可将培养上清等分为多个单位储存，尽量减少解冻和重新冰冻的次数
实验步骤
材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)
杂 交 瘤（单 元 1.3)
V DMEM-IO 完全培养基
175 cm2 组织培养用细颈瓶
50m l 塑料锥底离心管，无菌
Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）
1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用（细胞密度应达到 IXlO6〜2 X 106 个细胞/ml)。避免细胞生
长密度过高导致死亡。
2.以 1 :1 0 的比例分出部分细胞至另一个 175 cm2 培养瓶中。加 入 DMEM-IO 完全培养基 至 总 体 积 100 ml，培养至细胞过度生长，培 养 基 呈 黄 色（酸性），出现死亡细胞(大约 5d)。或者，将 高 密 度 细 胞（IXlO6〜2 X 106 个细胞/ ml) 随新鲜培养基转入培养瓶，培 养 2〜3d 直到出现死亡细胞。
3.将 培 养 瓶 内 容 物 转 入 50m l 锥底离 心 管 。室 温 下 ， 1500 g 离 心 lOmin。取 上 清 ，弃沉淀。
4.用适当的方法检测上清液中 M Ab 的滴度。
5.无菌环境储存培养上清；通 常 4°C 中可以储存数周到数月，一 20°C 中可以储存至数年 ，在一 70°C 可以永久储存。可将培养上清等分为多个单位储存，尽量减少解冻和重新冰冻的次数
