用活化剂裂解方法从悬浮培养的HeLa细胞中制备细胞核
实验原理
实验材料
试剂/试剂盒
实验步骤
2. 细胞在 1 L 的塑料离心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 离心机，H-600A 转头，3000 r/min 离心 5 分钟。
3. 在 30 ml 的 Corex 管中，用 10 ml 冰预冷的 PBS 清洗各细胞沉淀。
4. 细胞沉淀用 10 ml TM-2 缓冲液重悬浮，室温孵育 1 分钟。
TM-2 缓冲液：
0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)
0.002 mol/L MgCl2
0.0005 mol/L PMSF（临用前添加）
5. 将装有 TM-2 悬浮液的试管放到一个含冰水的烧杯中冰浴 5 分钟。
6. 加入 Tritron X-100 至终浓度为 0.5%，再冰浴 5 分钟。
7. 3 次通过 22 号针头剪切细胞。
8. 取 5 μl 加到一 22 mm2 的玻璃盖玻片上，在相差显微镜下检查细胞核。
9. 用 Sorvall 的 RC-5B 离心机，SS-34 转头在 4℃，800 r/min 离心 10 分钟，将细胞核从胞质中分离出来。
10. 用 10 ml TM-2 缓冲液清洗两遍细胞核。
