根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

10X BFTE 电泳缓冲液

DMSO

乙二醇

乙二醇反应混合物

RNA 凝胶上样缓冲液

2. 凝胶

琼脂糖凝胶

3. 核酸和寡核苷

RNA 样品

RNA 大小标准参照物

4. 专用装置

水平电泳装置

透明尺

预置到 55℃ 的水浴

二、方法

1. 配制乙二醛变性反应液。在无菌离心管中混合：

RNA（总共 10 μg） 1~2 μl，乙二醇反应缓冲液 10 μl。

2. 盖上离心管的盖子，将 RNA 溶液在 55℃ 放置 60 min, 在冰水中冰浴 10 min, 然后离心 5s，使所有液体沉到离心管底部。

3. 在样品加热过程中，将琼脂糖凝胶装到水平电泳仪的盒子中。加入足够的 1X BPTE 电泳缓冲液，使其没过凝胶约 1 mmol/L。

4. 将 1~2 μl RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的 RNA 样品中，然后马上把 RNA 样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将 RNA 相对分子质标准参照物加到最外面的孔中。

5. 以 5 V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约 8 cm。

6. 将凝胶放在保鲜膜上，在紫外灯下观察 RNA。把透明尺和凝胶对齐，在紫外灯下拍照。

7. 在照片上量出从加样孔到各 RNA 条带的距离。以 RNA 片断大小的对数（log₁₀）值对迁移的距离作图。用得到的曲线计算点杂交检测到的 RNA 的大小。

8. 用上行或下行毛细管转移法把 RNA 固定在固体支持物上。

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