用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验_实验⽅法

实验原理

可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般来说，它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定，另外噬菌体最初的接种量也大。但是，在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。

实验材料

λ 噬菌体原种

试剂/试剂盒

氯仿 SM

仪器/耗材

LB 或 NZCYM 琼脂平板 Sorvall SS-34 或相当型号 30℃培养箱聚丙烯培养管

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

氯仿，SM。

2. 培养基

预热至 37℃ 的 LB 或 NZCYM 培养基

3. 离心机和转子

Sorvall SS-34 或相当型号。

4. 专用设备

30℃ 培养箱

聚丙烯培养管（17 mm X 100 mm）

5. 载体和菌株

λ 噬菌体原种

二、方法

1. 接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至 5 ml NZCYM 或 LB 培养基中，30℃ 剧烈振荡培养过夜。

2. 转接 0.1 ml 新鲜的细菌过夜培养物（步骤 1 制备）至一无菌的 17X100 mm 聚丙烯培养管中，该管带有一松扣的盖，然后加入 50~100 μl 约含 10⁶ pfu λ 噬菌体的 SM 进行感染。

3. 将感染培养物于 37℃ 放置 20 min，使噬菌体颗粒吸附至细菌上。

4. 加入 4 ml 预热的 NZCYM 或 LB 培养基，剧烈振荡培养直到裂解发生（通常 37℃ 培养 8~12 h)。

如果培养 12 h 后，裂解还没有发生或不完全，则在培养物中加入等体积的预热 NZCYM 或 LB 培养基，37℃ 继续剧烈振荡培养 2~3 h。

5. 裂解发生后，加入两滴（约 100 μl）氯仿，37℃ 继续培养 15 min。

6. 4℃ 4000 g ( 5800 r/min Sorvall SS-34 转子）离心 10 min。

7. 回收上清，加 1 滴（约 50 μl ) 氯仿，将病毒原种进行保存。

实验方法

用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验