实验方法

PVDF膜上蛋白的可逆染色

难度系数: 1.0

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PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于:Western杂交时,确认蛋白是否转至PVDF膜上。

PVDF膜上蛋白的可逆染色

实验原理

丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时也可以与蛋白质的非极性区相结合,从而形成红色的条带。

实验材料

蛋白

仪器/耗材

PVDF膜

实验步骤

1.  氨基黑染色


染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropa nol (v/v) and 10% acetic acid.


染色:将 PVDF 膜置于染液中染色数钟,ddH2O脱色。


2. 考马斯亮蓝染色


染液:0.1% Coomassie Brillia nt Blue R-250 (w/v) and 50% met hanol (v/v)


脱色液:40% met hanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v)


染色:将 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.,脱色液脱色。


3.丽春红染色 Ponceau S


染液:0.2% w/v Ponceau S in TCA (3% v/v)


染色:将 PVDF 膜置于染液中染色 5min


脱色:ddH2O脱色

 

注意事项

丽春红染色液不适用于尼龙膜上蛋白的检测。

其他

丽春红的染色灵敏度不如考马斯亮蓝染色液。

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