实验方法

DNA 污染的洗脱后去除实验

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下述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改(DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

DNA 污染的洗脱后去除实验

实验原理

仪器/耗材

水浴锅

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液、溶液和试剂

用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水

EDTA,25 mmol/L

2. 酶和酶缓冲液

DNA 酶Ⅰ, 扩增级(无 RNA 酶)

DNA 酶Ⅰ缓冲液,10X

3. 核酸和寡核苷酸

RNA 样品

4. 特殊设备

水浴,预设为 65°C

二、方法

①向一无 RNA 酶的管中加下列成分。

RNA                                                 不多于 80ug

DNA 酶 I 缓冲液,10X                     1ul

DNA 酶 I(lU/ul)                                 1ul

用 DEPC 处理过的水将总体积调到 10ul。

②室温下温育 15 min。

③加 1ul25 mmol/L 的 EDTA 溶液,并于 65°C 加热 10min 以灭活 DNA 酶 I。

用这种方式处理的样品适合直接用于 RT-RCR。

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