高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验_实验⽅法

实验原理

试剂/试剂盒

仪器/耗材

实验步骤

一、材料

1. 试剂

甜菜碱（Sigma 公司）

dNTP 溶液（含四种 dNTP, 每种 25 mmol/L)

二甲基亚砜（DMSO)(Sigma 公司）

四甲基砜（Sigma 公司）

2. 酶和酶缓冲液

Taq 酶

Taq 酶缓冲液（Taq 酶制造商提供）

3. 核酸和寡核苷酸

人类基因组 DNA，每个反应中 20ng，

hRF3(hGSPTl) 引物：hRF3f   CCGC/CTCT/GTCG/TCGT/CGC

                                   hRF3r   CCGC/GCTG/AGGT/TCTC/CC

Klotho 外显子 la 引物：klolaf   CTCG/CAGG/TAAT/TATT/GCCAG

                                     klolar   GATG/GACG/CACC/CTTG

Klotho 外显子 lc 引物：klolcf   GTGC/AGCC/CGTG/GTCAC

                                   klolcr   GACT/CAGT/TCCC/ACAC/TTC

4. 设备

PCR 仪

5. 其他

琼脂糖凝肢电泳所需设备和试剂

二、方法

1. 在灭菌的 0.2 ml 的 PCR 管中加入下列试剂。

基因组 DNA                                20ng

引物（每种）                             15pmol

Taq 酶                                         0.5U

10 x buffer                                  2.5ul

dNTP 溶液（含四种 dNTP)         250umol/L

加 H₂0 到                                  25ul

根据处理条件的不同，分别包含 DMSO(5%)、甜菜碱（lmol/L)、甜菜碱（2mol/L)、甜菜碱（lmol/L) 和 DMS0(5%)、甜菜碱（2mol/L) 和 DMS0(5%)、四甲基砜(0.4mol/L)，对照不加任何其他试剂。

2. 采用下列程序 A 或 B 运行 30 个循环。

实验方法

高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验