实验原理

1. 从小牛取胸主动脉。

2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。

3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。

4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。

5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。

6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面，以除去内皮细胞。

7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。

8. 将中膜切成约 1 cm² 大小的组织块。

9. 将中膜组织块放入 60 mm × 15 mm Petri 培养皿，内膜侧朝下。

10. 让组织块贴壁约 10 min。

11. 直接在组织块上注 1 ml SMCM（平滑肌培养液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素）。

12. 将组织块放入湿润的培养箱，在 37°C 和 10% CO₂ 条件下孵育。

13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿让组织块去附着。

14. 将组织块继续孵育 10 d。此后，平滑肌细胞从组织块迁移出来，并变为单层。

15. 细胞生长接近形成单层时，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液传代。

实验材料

0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液

试剂/试剂盒

平滑肌培养液

仪器/耗材

Petri培养皿 手术刀和10号手术刀片 解剖剪 组织镊

实验步骤

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