PCR-SSP分析实验
实验原理
实验材料
实验步骤
1.PCR扩增PCR反应体系为20μl(2个体系,分别为引物1和引物2),含模板2μl(约50ng),引物各1.5μl,dNTP1.6μl(0.4mM),10×Buffer缓冲液2μl,Taq酶1.0U,加双蒸水至20.0μl;PCR反应条件为94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min,30个循环。
2.PCR 扩增产物的检测 取PCR 扩增产物2μl,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳(T=6%,C=3.3%,凝胶规格为82mm×64mm×0.75mm)。电极缓冲液为1×TBE。将加有1/5 体积上样缓冲液的酶切产物电泳,220 v 电压,电泳2-3h。银染显色
①如引物结合序列存在碱基变异可能无扩增产物,导致错误判型;②在对照样品分型准确的基础上才能判定结果。注意事项
2、在对照样品分型准确的基础上才能判定结果。