一、材料

无菌 

 1. 活检标本 

 2. 1.2 ml 塑料冻存管（Nagle Nunc）

3. DBBS

4.  收集液

5.  二甲基亚砜（如果放在一个无菌容器中，为半灭菌的）

6.  器皿（解剖刀、解剖镊、培养皿等，同为原代培养）

二、操作步骤
1.  除去坏死组织、脂肪和纤维组织后，将肿瘤切成约 1~2 mm 的小块。同原代培养，将肿瘤块放入 DBBS 中浸洗。

2.  在每个冻存管中放入 4 或 5 个肿瘤块。

3.  将 1 ml 含有 10%DMSO 的生长培养液加入到放有肿瘤块的冻存管中，在室温下放置 30 min。

4.  将冻存管按 1°C/min 冷冻（见方案 20.1），然后将冻存管移入液氮罐。为了避免爆炸危险，不要将冻存管浸入液氮。

5.  将冻存管放在 37°C 温水中，使其融化（要有适当的预防措施，见方案 20.2）。

6.  用乙醇将冻存管彻底擦拭后打开，使肿瘤块沉淀后，吸出一半培养液。

7.  缓慢补充不含 DMSO 的新鲜培养液，轻轻摇动混合后，放置 5 min。

8.  用不含 DMSO 的培养液逐渐置换全部的培养液，然后将肿瘤块移入 Petri 培养皿，按常规原代培养方法进行操作，但每培养瓶中放入两倍多细胞。