方案22.1 染料排斥法测定细胞生存力实验_实验⽅法

实验原理

萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。

将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。

试剂/试剂盒

仪器/耗材

实验步骤

材料

无菌

受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞
合适的生长液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非灭菌

血细胞计数板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
显微镜
手执计数器

操作步骤

1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X10⁶ 个/ml)。

2. 取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片间定在适当位置上（见方案 21.1 和图 21.1)。

3 . 将一滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀。

4 . 加至血细胞计数板的计数室中（见方案21.1)。

5 . 静置1～2min (但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。

6 . 将计数板置于显微镜下，选择10X 物镜，利用网格线聚焦（图21.1)。
7 . 计数细胞总数以及着色细胞数。

8 .清洗血细胞计数板，放人盒内。

实验方法

方案22.1 染料排斥法测定细胞生存力实验