去蛋白终点法测定血清肌酐（Cr）实验_实验⽅法

实验原理

血清（浆）中的肌酐与碱性苦味酸反应，生成黄红色的苦味酸肌酐的复合物，在 510 nm波长比色测定

试剂/试剂盒

实验步骤

一、实验试剂：

1. 0.04mmol/L苦味酸溶液：苦味酸(AR)9.3g，溶于500ml蒸馏水中冷却至室温。加蒸馏水至1升，用0.1mol/L氢氧化钠滴定，以酚酞作指示剂，根据滴定用蒸馏水稀释至0.04mol/L贮存于棕色瓶中。

2. 0.75mmol/L氢氧化钠：氢氧化钠(AR)30g，加蒸馏水少许使其溶解，冷却后用蒸馏水稀释至1升。

3. 35 mmol/L钨酸溶液：

① 100ml 蒸馏水中加入1g聚乙烯醇，加热助溶（不能煮沸）冷却。

② 300ml 蒸馏水中加入11.1g钨酸钠，使完全溶解。

③ 300 ml 蒸馏水中慢慢加入 2.1ml 浓硫酸冷却。

于 1 升容量瓶中，将①液加入②液中，再与③混匀。再加蒸馏水至刻度，置室温保存至少可稳定一年。

4. 10 mol/L肌酐标准贮存液：肌酐（MW，13.12）113mg用0.1mmol/L盐酸溶解，并移入100ml容量瓶中，再以0.1mol/L盐酸稀释至刻度，保存于冰箱内稳定一年。

5. 10μmol/L肌酐标准应用液：准确吸取10mmol/L肌酐标准贮存液1.0ml加入1000ml容量瓶内，以0.1mol/L盐酸稀释至刻度，保存于冰箱内。

二、实验操作：

于16mm×100mm试管中，置血清（或血浆）0.5ml，加人35mmol/L钨酸溶液4.5ml，充分混匀。30O0r/min，离心10分钟，取上清液，按表3-6-4测定

尿液标本用蒸馏水作1:2O0稀释后，亦按表测定

混合后，室温放置15分钟，分光光度计510nm波长，比色杯光径1.0cm以空白管调零。读取各管吸光度

三、计算：

血清（浆）肌酐μmol/L=测定管极光度/标准管吸光度×100

尿液肌酐μmol/L=测定管极光度/标准管吸光度×100×200×24小时尿量(L)

参考值：男性44-133μmol/L（0.5-1.5 mg/dL）

女性 70-106μmol/L（O.8-1.2 mg/dL）

注意事项

1. 温度升高时，可使碱性苦味酸溶液显色增深，但标准液与测定的增生程度不成正比例，因此测定各管温度均需升室温。

2. 血清（浆）标本如不当时定，可于冰箱保存3天，只能保持较长时间宜-20℃保存，轻微溶血标本对测定肌酐影响，可使肌酐结果偏高。

3. 肌酐测定的回收率受无蛋白溶液的PH影响，溶液PH在3-4.5时，回收率为85-90％ PH2时回收率100%。

实验方法

去蛋白终点法测定血清肌酐（Cr）实验