测定用乙醇固定的 DNA 的含量
实验原理
实验材料
实验步骤
一、培养细胞的 DNA 含量的测定
制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中； 加入 2ml 预冷的 70%乙醇，4℃保存；
1. 取单细胞悬液 1——2×106 个细胞于 PBS（PH=7.2）缓冲液中；
2. 300g 离心 5 分钟，弃上清，反复两次；
3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中；
4. 将细胞悬液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30 分钟。 在 4℃条件下可保存 2——3 周。
2、新鲜组织的 DNA 含量的测定
1. 用 200mg 湿重组织用机械法制成单细胞悬液；
2. 500g 离心 5 分钟；
3. 弃上清，重悬于 10ml 染色- 去污剂中；
4. 再过滤，用 200 目的筛网或 70——80μm 的筛网过滤；
5. 上机检测。
3、石蜡包埋组织切片的 DNA 含量的测定
1. 从石蜡包埋切取切片 50 μ m 厚，2——3 片，制成单细胞悬液；
2. 用 PBS 缓冲液洗涤，500g 离心 5 分钟，弃上清；
3. 加入 PI 液 1ml 室温避光 30 分钟；
4. 调整细胞浓度为 1×106/ml；
5. 上机检测。
注意事项
2. 将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至 0——4℃;
3. 细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增 加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时） .
