实验方法

血液形态学观察实验

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本实验来源于贵阳中医学院基础医学实验教学中心网站

血液形态学观察实验

实验原理

1. 染色:瑞特氏(Wright’s)法

刺破耳垂或指尖,取血一滴,置玻片上,用另一玻片以30度角将血液推成厚薄均匀之涂片。干燥后,用瑞特氏染液数滴加于涂片上,再加蒸馏水,然后水洗至粉红色,干后即可观察。瑞氏染液用美蓝和伊红混合配制而成,其中部分美蓝氧化成为天青。染色后,对碱性染料美蓝有亲和力的部位呈蓝色;对酸性染料伊红有亲和力者呈鲜红色;对天青有亲和力者呈紫红色;对酸性染科和碱性染科都没有较强亲和力者则着色轻微,呈淡红色或淡紫色。

2. 肉眼观察:

标准的血涂片呈一很薄的“血膜”,一端平直(后端),另一端呈圆弧形(前端),故整体呈舌形。由于血涂片封片后易于退色,故一般未加盖玻片。注意仔细观察辨认血涂片的正反面,将有血膜面朝上置于低倍镜下观察。

3. 低倍镜观察:

大部分是红色无核的红细胞,其中散布少量白细胞,核染成蓝色。选择细胞分布均匀且白细胞较多的部位,涂片一般后半部较好。

4. 高倍镜观察:

通过微调节器确认低倍镜下看到的细胞(以白细胞为佳),以保证血涂片的血膜面朝

上。

5. 油镜观察

辨认红细胞、各种白细胞及血小板。注意参看教材所附的彩图。

(1) 红细胞:圆形,无核,呈红色,中央着色较边缘浅(何故?)

(2)中性粒细胞:圆形,比红细胞大,胞质呈淡红色,内含淡紫红色的细小颗粒,分布均匀。核分叶,2~5叶不等,大多为2~3叶。叶间有染色质丝相连,染成蓝色,也有不分叶的杆状核。

(3)嗜酸性粒细胞:数量较少,较中性粒细胞大,胞质呈淡红色,内含大量粗大的桔红色颗粒,分布均匀而密集。核多为2叶,染成蓝色。

(4)嗜碱性粒细胞:数量极少,很难找到。胞质内含大小不等的蓝色颗粒,分布不均,常遮盖核。核分叶、S形或不规则形,着色浅。

(5)淋巴细胞:大小不一,以小淋巴细胞居多,其直径似红细胞。核呈圆形,占细胞的大部,一侧稍有凹陷。染色质致密呈块状,染成深蓝色。胞质少,呈一窄带围绕核,染成蔚蓝色,有时含少量紫红色的嗜天青颗粒。大的淋巴细胞胞质较多,核染色浅。

(6)单核细胞:体积最大,数量较少。核呈肾形与马蹄铁形,染色质颗粒细而松散,故染色较浅;胞质较多,染成灰蓝色,内含较多细小的嗜天青颗粒。

(7)血小板:体积最小,直径约为红细胞的1/3,成群分布在血细胞之间,呈不规则形,胞质染成浅蓝色,中央含紫色的颗粒。

白细胞分类计数:在熟悉各种血细胞形态的基础上,用高倍镜或油镜进行白细胞分类计数。为了避免重复计数,可按图5所示的顺序推移玻片,观察50~100白细胞,分别记录其种类,并将结果核算成百分数。

实验步骤

1. 染色:瑞特氏(Wright’s)法

刺破耳垂或指尖,取血一滴,置玻片上,用另一玻片以30度角将血液推成厚薄均匀之涂片。干燥后,用瑞特氏染液数滴加于涂片上,再加蒸馏水,然后水洗至粉红色,干后即可观察。瑞氏染液用美蓝和伊红混合配制而成,其中部分美蓝氧化成为天青。染色后,对碱性染料美蓝有亲和力的部位呈蓝色;对酸性染料伊红有亲和力者呈鲜红色;对天青有亲和力者呈紫红色;对酸性染科和碱性染科都没有较强亲和力者则着色轻微,呈淡红色或淡紫色。

2. 肉眼观察:

标准的血涂片呈一很薄的“血膜”,一端平直(后端),另一端呈圆弧形(前端),故整体呈舌形。由于血涂片封片后易于退色,故一般未加盖玻片。注意仔细观察辨认血涂片的正反面,将有血膜面朝上置于低倍镜下观察。

3. 低倍镜观察:

大部分是红色无核的红细胞,其中散布少量白细胞,核染成蓝色。选择细胞分布均匀且白细胞较多的部位,涂片一般后半部较好。

4. 高倍镜观察:

通过微调节器确认低倍镜下看到的细胞(以白细胞为佳),以保证血涂片的血膜面朝

上。

5. 油镜观察

辨认红细胞、各种白细胞及血小板。注意参看教材所附的彩图。

(1) 红细胞:圆形,无核,呈红色,中央着色较边缘浅(何故?)

(2)中性粒细胞:圆形,比红细胞大,胞质呈淡红色,内含淡紫红色的细小颗粒,分布均匀。核分叶,2~5叶不等,大多为2~3叶。叶间有染色质丝相连,染成蓝色,也有不分叶的杆状核。

(3)嗜酸性粒细胞:数量较少,较中性粒细胞大,胞质呈淡红色,内含大量粗大的桔红色颗粒,分布均匀而密集。核多为2叶,染成蓝色。

(4)嗜碱性粒细胞:数量极少,很难找到。胞质内含大小不等的蓝色颗粒,分布不均,常遮盖核。核分叶、S形或不规则形,着色浅。

(5)淋巴细胞:大小不一,以小淋巴细胞居多,其直径似红细胞。核呈圆形,占细胞的大部,一侧稍有凹陷。染色质致密呈块状,染成深蓝色。胞质少,呈一窄带围绕核,染成蔚蓝色,有时含少量紫红色的嗜天青颗粒。大的淋巴细胞胞质较多,核染色浅。

(6)单核细胞:体积最大,数量较少。核呈肾形与马蹄铁形,染色质颗粒细而松散,故染色较浅;胞质较多,染成灰蓝色,内含较多细小的嗜天青颗粒。

(7)血小板:体积最小,直径约为红细胞的1/3,成群分布在血细胞之间,呈不规则形,胞质染成浅蓝色,中央含紫色的颗粒。

白细胞分类计数:在熟悉各种血细胞形态的基础上,用高倍镜或油镜进行白细胞分类计数。为了避免重复计数,可按图5所示的顺序推移玻片,观察50~100白细胞,分别记录其种类,并将结果核算成百分数。

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