免疫酶标技术_实验⽅法

先将酶与抗体结合形成酶标抗体，然后和相应的抗原反应，使抗原抗体复合物上带有酶分子，再与酶的底物H₂O₂—DAB（3’3—二胺荃联苯胺）发生显色反应，在显微镜下观察，根据颜色产物检测相应抗原。

抗体

1. 标本固定；

2. PBS洗涤2×3 分钟；

3. 1 %H₂O₂（或1 %H₂O₂甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；

4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；

5. 滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜；

6. PBS洗3×3 分钟；

7. DAB+H₂O₂显色5～10 分钟，镜下控制染色结果。DAB+H₂O₂应于用前15 分钟配制。

8. 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。

直接法的优点是特异性高，非特异性染色轻，缺点是敏感性低，必须对第一种抗体都进行标记，操作不便，目前只用于单克隆抗体的筛选及酶联免疫吸附试验。

实验方法