表皮细胞培养实验
实验原理
实验步骤
1. 取材
取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成 0.5~1 平方厘米小块;
取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成 0.5~1 平方厘米小块;
2. EDTA处理
先置入0.02 %EDTA 中室温置5 分钟;
3. 冷消化
换入0.25 %胰蛋白酶中,置4 ℃过夜;
4. 分离
取出皮块,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开;
5. 温消化
取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25 %胰蛋白酶中,37 ℃再消化30~60 分钟;
6. 用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液;
7. 培养液
通过80 目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和 20 %小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2温箱培养。